Antinukleární protilátky (ANA)

Antinukleární protilátky jsou součástí komplexního diagnostického procesu systémových onemocnění pojivové tkáně. Složitý mechanismus tvorby antinukleárních protilátek ztěžuje interpretaci jejich výsledků a přítomnost nebo nepřítomnost jednotlivých protilátek nemusí vždy znamenat chorobný proces. Jaké jsou typy antinukleárních protilátek? Kdy by měl být test proveden?

Obsah:

1. Antinukleární protilátky - typy
2. Antinukleární protilátky - tvorba a mechanismus účinku
3. Antinukleární protilátky - indikace pro studii
4. Antinukleární protilátky - jaký je test?
5. Antinukleární protilátky - jak interpretovat výsledek?

Anti-nukleární protilátky (ANA) jsou autoprotilátky namířené proti prvkům buněčného jádra, např. DNA a cytoplazmě. Jsou jednou z nejrozmanitějších a nejvíce studovaných protilátek.

Antinukleární protilátky - typy

• protilátky proti extrahovatelným jaderným antigenům (anti-ENA):
• proti DNA topoizomeráze I (anti-Scl70)
• proti ribonukleoproteinu (anti-RNP)
• proti antigenu Smith (anti-Sm)
• anti-Mi2 / Mi-2
• anti-Ro (SS-A)
• anti-La
• anti-Jo1
• anti-PM-Scl
• anti-Kn
• protilátky proti jadernému proteinu tvořícímu póry gp-2010 (anti-gp-210)
• protilátky proti nativní dvouvláknové DNA (anti-dsDNA)
• anti-centromerické protilátky (anti-ACA)

Antinukleární protilátky - tvorba a mechanismus účinku

Autoimunita je abnormální reakce imunitního systému proti jeho vlastním tkáním, která vede k výskytu autoimunitních onemocnění.

Byly popsány různé mechanismy autoimunity, jedním z nich je uvolňování antigenů skrytých před imunitním systémem, například v důsledku zánětlivého poškození tkáně.

Poté se uvolní prvky nalezené v buněčném jádru, např. DNA, RNA, histony, které imunitní systém začne rozpoznávat jako něco cizího a vytváří proti nim protijaderné protilátky.

Antinukleární protilátky - indikace pro studii

• podezření na onemocnění pojivové tkáně:
• systémový lupus erythematodes (přítomnost protilátek u 95–100% pacientů; protilátky proti dsDNA jsou specifickým markerem onemocnění)
• lupus vyvolaný léky (95-100% pacientů)
• antifosfolipidový syndrom (40-50% pacientů)
• systémová sklerodermie (80-95% pacientů, zejména protilátky anti-Scl70)
• polymyositida a dermatomyositida (40-80% pacientů, zejména protilátky anti-Jo1 a anti-Mi2)
• Sjögrenův syndrom (48-96% pacientů, zejména anti-Ro a anti-La protilátky)
• revmatoidní artritida (asi 10% pacientů)
• juvenilní idiopatická artritida (méně než 10% pacientů)
• Raynaudův syndrom (20–60% pacientů)
• fibromyalgie (15-25% pacientů)
• smíšená onemocnění pojivové tkáně (95-100% pacientů)
• hodnocení aktivity nemoci a monitorování účinnosti léčby, např. anti-dsDNA protilátky u systémového lupus erythematodes
• korelace přítomnosti protilátek s výskytem specifických symptomů onemocnění, např. Sjögrenův syndrom a přítomnost protilátek anti-Ro a anti-La
• předpovídání nemoci v budoucnosti

Antinukleární protilátky - jaký je test?

Krev se odebírá z ohybu lokte na lačný žaludek a používá se ke stanovení antinukleárních protilátek.

Metody pro stanovení protilátek jsou velmi odlišné a závisí na typu měřené antinukleární protilátky. Jedná se hlavně o imunologické metody, jako jsou:

• ELISA
• RIA
• nepřímá imunofluorescence
• metoda dvojité imunodifúze
• western blot

V případě antinukleárních protilátek se používá dvoustupňová diagnostika. Nejprve se provede screeningový test pomocí metody nepřímé imunofluorescence, která se vyznačuje vysokou citlivostí.

Metoda nepřímé imunofluorescence spočívá v imobilizaci buněk HEp-2 odvozených z lidských epiteliálních buněk na mikroskopickém sklíčku.

Buňky této linie mají ve své cytoplazmě a buněčných jádrech antigeny, které vážou patologické protilátky z krve pacienta.

Po přidání séra pacienta do sklenice se antinukleární protilátky vážou na specifické antigeny a jsou viditelné pod mikroskopem díky speciálním fluorescenčním značkám.

Výhodou nepřímé imunofluorescence je možnost diferenciace typů protilátek na základě typu osvětlení fluorescenčního barviva.

Například záře jádra homogenního typu indikuje přítomnost anti-dsDNA nebo anti-ssDNA protilátek.

Pozitivní výsledek screeningového testu musí být vždy potvrzen. Za tímto účelem se používají velmi specifické imunologické metody, např. Western blot. Po detekci přítomnosti a identifikaci typu antinukleární protilátky se stanoví její titr, tj. Nejvyšší ředění séra, ve kterém lze detekovat přítomnost protilátek.

Antinukleární protilátky - jak interpretovat výsledek?

Správný titr antinukleárních protilátek by měl být pod 1:40.

Pokud je screeningový test na antinukleární protilátky negativní a neexistují žádné klinické příznaky naznačující systémové onemocnění pojivové tkáně, diagnóza by neměla být rozšířena o specifické protilátky, např. Anti-dsDNA, anti-Sm.

Za klinicky relevantní titry se považují ≥ 1: 160 u dospělých a ≥ 1:40 u dětí.

V případě pozitivních výsledků se navrhuje interpretovat výsledek testu následovně:

• titr 1: 40-1: 80 - hraniční výsledek (slabě pozitivní), při absenci klinických příznaků onemocnění pojivové tkáně se nedoporučuje test opakovat ani provádět následný test, protože výsledky se u většiny lidí v průběhu let nemění
• titr 1: 160-1: 640 - středně pozitivní výsledek, při absenci klinických příznaků onemocnění pojivové tkáně se doporučuje test opakovat po 6 měsících
• titr ≥ 1: 1280 - vysoký pozitivní výsledek, za přítomnosti klinických příznaků onemocnění pojivové tkáně je k diagnostice onemocnění nutná další odborná diagnostika

Je třeba mít na paměti, že sérologické testování antinukleárních protilátek je součástí komplexního diagnostického procesu a pozitivní výsledek musí být vždy interpretován v kontextu klinického obrazu a přítomnosti charakteristických příznaků onemocnění.

Antinukleární protilátky s nízkým titrem jsou přítomny u 5% zdravé populace a jejich frekvence s věkem stoupá.

Kromě toho se jejich přítomnost vyskytuje ve fyziologických a patofyziologických podmínkách, ve kterých antinukleární protilátky nemají žádný diagnostický význam:

• infekce, např. tuberkulóza, syfilis, malárie
• onemocnění jater, např. cirhóza jater
• plicní onemocnění, např. sarkoidóza, azbestóza
• rakoviny, např. leukémie, lymfom, rakovina prsu, melanom
• kožní onemocnění, např. psoriáza, lichen planus
• po transplantaci orgánu, např. transplantaci srdce, transplantaci ledviny
• užívání léků, např. antiepileptik, hydralazinu, solí lithia,
• další autoimunitní onemocnění, např. Hashimotova choroba, Addisonova choroba, diabetes typu I
• těhotenství (až 20% těhotných žen)

Stojí za to vědět ...

Etnická variace charakterizuje vznik různých typů antinukleárních protilátek.

Například bělošští pacienti se systémovou sklerózou mají větší pravděpodobnost anti-ACA protilátek a afroameričané a Afričané mají větší pravděpodobnost, že budou mít protilátky reagující na topoizomerázu.

Doporučený článek:

Diagnostický test ANA (antinukleární protilátky)

Literatura

1. Fischer K. a kol. Autoprotilátky v revmatologické praxi. Fórum Reumatol. 2016, 2, 1, 39–50.
2. Vnitřní nemoci, editoval Szczeklik A., Medycyna Praktyczna Kraków 2010
3. Laboratorní diagnostika s prvky klinické biochemie. Příručka pro studenty medicíny vydaná autory Dembińska-Kieć A. a Naskalski J.W., Elsevier Urban & Partner Wydawnictwo Wrocław 2009, 3. vydání

O autorovi

Karolina Karabin, MD, PhD, molekulární biolog, laboratorní diagnostik, Cambridge Diagnostics Polska Biolog se specializací na mikrobiologii a laboratorní diagnostik s více než 10 lety zkušeností v laboratorní práci. Absolvent Fakulty molekulární medicíny a člen Polské společnosti pro lidskou genetiku, vedoucí výzkumných grantů v Laboratoři molekulární diagnostiky na Ústavu hematologie, onkologie a interních chorob Lékařské univerzity ve Varšavě. Na 1. lékařské fakultě Varšavské lékařské univerzity obhájila titul doktora lékařských věd v oboru lékařské biologie. Autor mnoha vědeckých a populárně-vědeckých prací v oblasti laboratorní diagnostiky, molekulární biologie a výživy. Denně jako specialista v oblasti laboratorní diagnostiky vede věcné oddělení v Cambridge Diagnostics Polska a spolupracuje s týmem dietologů na CD Dietary Clinic. Své praktické poznatky z diagnostiky a dietoterapie nemocí sdílí s odborníky na konferencích, školeních a v časopisech a na webových stránkách. Zvláště se zajímá o vliv moderního životního stylu na molekulární procesy v těle.

Přečtěte si více článků od tohoto autora