Průtoková cytometrie je diagnostická a výzkumná technika známá po mnoho let a široce používaná v onkologii. Průtoková cytometrie umožňuje zkoumat buňky, které tvoří suspenzi v laminárním nebo stratifikovaném kapalném proudu, pomocí zařízení zvaného průtokový cytometr. Jaké jsou indikace pro průtokovou cytometrii a jak se provádí?
Průtoková cytometrie se používá při diagnostice hematologických novotvarů, protože se jedná o kapalné nádory, ale je to pouze pomocná metoda. Je však třeba si uvědomit, že existuje jedna rakovina, kterou lze diagnostikovat pouze touto metodou. To je chronická lymfocytární leukémie.
U jiných neoplastických onemocnění se průtoková cytometrie používá jako diagnostická pomůcka, protože vykazuje velmi důležité rysy neoplastických buněk. Tato metoda se také používá k posouzení účinnosti použité léčby.
Průtoková cytometrie - co ukazuje?
Proud kapaliny obsahující testované částice prochází konstantní rychlostí (100–2 000 částic za sekundu) měřicí oblastí cytometru. Zde optické metody analyzují tvary, rozměry, vnitřní strukturu buněk a jejich obsah, např. DNA. Všechny buňky jsou opticky označeny.
Měření jsou založena na rozptylových vlastnostech laserového světla jednotlivými buňkami nebo jejich složkami (jádra, chromozomy, mitochondrie) nebo na jimi indukované fluorescenci.
Optické signály jsou převedeny na elektrické signály, které jsou po analýze graficky prezentovány jako mono- nebo biparametrické distribuce.
Cytometr také umožňuje segregaci částic po opuštění měřící zóny. Lze říci, že přístroj uspořádá (odděluje) buňky se stejnými složkami (preparativní třídění) nebo extrahuje specifické typy buněk (analytické třídění).
Průtoková cytometrie umožňuje studium populačních charakteristik buněk, analýzu buněčných složek (zejména nukleových kyselin, proteinů, povrchových a buněčných antigenů), enzymatickou aktivitu, membránový potenciál, mitochondriální aktivitu, intracelulární pH, iontový transport a tekutost membrány.
Průtoková cytometrie - aplikace
Průtoková cytometrie používaná v diagnostice umožňuje určit fenotyp neoplastických buněk a expresi jednotlivých proteinů. K dosažení tohoto cíle se používají značené fluorescenční protilátky, které se charakteristickým způsobem vážou na antigeny na povrchu buněčné membrány. Díky tomu je možné určit míru jejich diferenciace, původu, prognostických a terapeutických markerů, které usnadňují rozhodování o dalších diagnostických a terapeutických postupech.
Další aplikací pro průtokovou cytometrii je sledování účinnosti aplikované léčby hodnocením tzv „reziduální nemoc“, což je procento buněk s fenotypy podobnými nádoru, které po léčbě zůstanou.
Průtoková cytometrie také usnadňuje výzkum rakoviny. Díky této metodě je možné hledat např. Receptory, které se nacházejí na povrchu neoplastických buněk a mohou se stát cílem léčby.
Metoda umožňuje vyhodnotit aktivitu proteinů uvnitř buňky. Je také možné vyhodnotit buněčný cyklus, např. Stanovením množství DNA v buňce.
V procesu proliferace buňka prochází buněčným cyklem fázemi, ve kterých zdvojnásobuje množství DNA. Vyhodnocením tohoto množství je možné určit, ve které fázi jsou buňky, ať už proliferují nebo ne, nebo zda přecházejí do apoptózy. Jinými slovy, pomocí průtokové cytometrie můžete zjistit, zda se buňky připravují na apoptózu, programovaný proces smrti.
Průtoková cytometrie - budoucnost
Průtoková cytometrie je v medicíně známá a používá se již několik desetiletí. Neustále se však zdokonaluje a vytváří nové diagnostické a výzkumné možnosti. V prvním období používání této metody bylo možné určit pouze velikost a stupeň zrnitosti buněk.
Použití laserového světla v zařízeních pro průtokovou cytometrii umožňuje excitovat určité fluorescenční markery a poté vyhodnotit jejich emise. Moderní cytometry umožňují významné zvýšení počtu markerů, které se hodnotí najednou, což se rozhodně promítne do zvýšení citlivosti této metody.
Proto se používá nejen při diagnostice neoplastických onemocnění, ale také k hodnocení účinnosti léčby.
O autorovi
Přečtěte si více článků od tohoto autora
